艾滋病檢測的方法有很多種，每種檢測方式都有不同的優(yōu)勢與劣勢，下面小編就來給大家分享一下艾滋病檢測的方法，以及詳細的說明它們之間的優(yōu)劣勢區(qū)分；

檢測艾滋病的方法：

1.HIV-1 Quantiplex (bDNA)實驗;它是分支DNA 雜交實驗。血漿 HIV-1 RNA通過逐級放大的信號定量而不是靶核酸的擴增，不需要RNA提取和純化以及PCR 擴增。主要步驟是：首先離心濃縮病毒顆粒，然后用去垢劑和蛋白酶 K裂解毒粒，釋放病毒RNA。裂解產(chǎn)物與兩組寡核苷酸探針一起孵育，第一組捕獲病毒RNA、與HIV-l pol基因的保守區(qū)雜交，同時與結(jié)合在微孔板上的寡核苷酸探針雜交。

第二組寡核苷酸探針進行信號放大，它包括4種成分：與靶RNA和預放大寡核苷酸均具有同源性的寡核苷酸探針、預放大寡核苷酸探針、放大寡核苷酸探針和與堿性磷酸酶結(jié)合的寡核苷酸探針。每一個組分都通過雜交與下一個位點結(jié)合，按照這種方式，信號被逐級放大而靶RNA 并沒有復制。

用堿性磷酸酶特異的底物通過化學發(fā)光進行檢測，發(fā)光強度與結(jié)合的核酸量成正比，HIV-1 RNA的絕對量由在同一板上反應的外標曲線來確定。

信號擴增的主要優(yōu)點是避免了提取和擴增目標核酸可能帶來的固有的錯誤，試驗的重復性相當好，特別是存動態(tài)范圍的下限。由于并沒有PCR反應，不會受能夠抑制 Taq DNA聚合酶的血漿物質(zhì)和抗凝劑(例如肝素)的影響。實驗使用針對HIV-1 pol基因多個保守區(qū)的80多條寡核苷酸探針，能夠與HIV-1 M群的A-oF亞型結(jié)合，最大限度減少了病毒基因變異對實驗準確性的影響。

HIV-1 Quantiplex (bDNA)實驗已經(jīng)被美國FDA 批準。3.0 版實驗方法對探針設計和稀釋液配方作了較大改進，目的是盡可能減少非特異雜交、增強信號的強度，從而降低背景信號、提高敏感性。3.0版也提高了擴增容量，每塊板能做 84份標本。除了標準方法以外，還發(fā)展了超敏感方法，檢測的動態(tài)范圍可以達到75- 500 000cp/ml。

如果先用標準方法有44%標本在檢測下限以下，需要用超敏法重復，如果先用超敏方法，有17%的標本在檢測上限以上，需要用標準方法進行重復，因此選擇艾滋病檢測方法時最好了解病人的情況，包括以前檢測的結(jié)果和抗病毒治療的歷史。

2. Amplicor HIV-1 Monitor實驗;它是基于目標Hiv-I RNA的cDNA的聚合酶鏈反應。用異硫氰酸胍法提取病毒RNA，用異丙醇沉淀核酸，使用熱穩(wěn)定重組的、具有逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA 聚合酶活性的rTth DNA多聚酶，逆轉(zhuǎn)錄和PCR –步完成。在生物素標記的HIV gag區(qū)引物、rTth DNA多聚酶、脫氧三磷酸核苷和合適的緩沖液成分存在的條件下，cDNA被擴增到非常高的拷貝數(shù)。

將擴增產(chǎn)物變性，單鏈DNA與微孔板上包被的HIV 特異性寡核苷酸探針結(jié)合，然后加過氧化物酶標記的親和素，與生物素標記的擴增產(chǎn)物結(jié)合，在加入HRP 特異的產(chǎn)色底物以后就可以確定擴增產(chǎn)物的數(shù)量。實驗使用已知濃度的內(nèi)部定量標準，在提取RNA 之前加到每份標本中，既可以定量標本中的HIV RNA，又可以彌補血漿中存在的影響提取和擴增的抑制因子。

內(nèi)標由體外轉(zhuǎn)錄的RNA組成，與靶擴增片段大小相同，并具有相同的HIV-1 gag區(qū)引物結(jié)合位點，產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物同樣也被捕獲在微孔板上，最后用酶聯(lián)檢測系統(tǒng)讀出光密度。

Amplicor Hiv-I Monitor是被美國FDA 批準的HIV-1 RNA定量實驗，1.0版能夠定量400-750 000 cp/ml的HIV RNA，需要0.2ml血漿。超敏試驗能夠檢測更低水平的HIVRNA，改進的方法包括增加標本用量(0. 5ml血漿)、超速離心濃縮病毒顆粒、減少重懸液體的體積等，這使得檢測的敏感性提高到50cp/ml。但是與此同時檢測的上限也下降了。因此將兩個版本的程序結(jié)合起來，檢測的動態(tài)范圍就是50~750 000 cp/ml。

但是如果沒有選用合適的方法，一份標本就需要檢測兩次，因此最好事先了解病人的情況，比如抗病毒治療的歷史、以前的病毒載量等，再決定使用哪一種方法。在共同的動態(tài)范圍內(nèi)，標準的和超敏的方法測定HIV RNA 濃度具有很好的相關(guān)性。1.5 版實驗也已經(jīng)推出，在美國只用于研究.1.5 版對M群內(nèi)所有的亞型都可以同等擴增，在引物、熱循環(huán)條件和緩沖液成分上有些不同。

1.0 版使用的引物是SK642和SK431，擴增片段是142bp的HⅣ-I gag序列。1.5版的引物也是在gag區(qū)域，但是上游引物變?yōu)镾K145，兩個堿基的變化增加了與M群病毒的同源性。下游引物變?yōu)镾KCCIB，向3’端保守區(qū)略微移動，與SK431相比有一個堿基的變化。1.5 版的退火溫度降低，緩沖液成分進一步增加了對HIV不同株的擴增。

為了適應擴增長度的增加，內(nèi)部定量標準(qs)增加了20個核苷，但是與1.0 版使用相同的捕獲探針，其他與1.0 版完全相同。

Amplicor HIV-1 Monitor方法的優(yōu)點是有內(nèi)部定量標準，被臨床和包括美國NIHACTG實驗室在內(nèi)的大批實驗室廣泛接受。試驗完成需要1天時間，可以同時檢測大量標本。由于使用的是PCR 擴增的方法，受PCR固有的一些因素的影響，包括污染的危險、一些血漿成分和抗凝劑可能影響酶活性等。這可以通過改進試驗操作加以克服，包括采用固定的工作流程、使用陽性和陰性對照以及內(nèi)部定量標準等。

3.NucliSens Hiv-1實驗;它是使用NASBA技術(shù)的靶擴增試驗。NASBA技術(shù)選擇性地直接擴增RNA而沒有PCR 步驟，用2個寡核苷酸引物、3個酶、三磷酸脫氧核苷和合適的緩沖液進行一步夾心雜交。首先用異硫氰酸胍和氧化硅顆粒提取高純度RNA，RNA通過重復的合成和轉(zhuǎn)錄雙鏈DNA中間體得到擴增。在AMV-RT的作用下，HIV-1 gag區(qū)的引物Pl介導由標本RNA合成cDNA，RNA鏈被RNAse 降解。

引物 P2結(jié)合啟動第二條DNA鏈合成，反義 RNA通過T7多聚酶啟動雙鏈DNA合成，這個循環(huán)不斷重復，使得靶RNA在等溫條件下大量擴增100萬～1000萬倍，然后直接用化學發(fā)光法確定核酸量，通過HIV 特異的gag和pol區(qū)的3個內(nèi)標同時擴增而達到定量目的。它具有高度敏感性和較寬的動態(tài)范圍。

最近NucliSens HIV-1定量實驗有了較大改進，將NASBA 核酸擴增技術(shù)與實時(real-time)檢測技術(shù)結(jié)合起來，能夠?qū)z測進行實時監(jiān)控。

結(jié)果表達方式由每毫升標本的拷貝數(shù)(cp/ml)改變?yōu)槊亢辽龂H單位(IU/ml)。這個實驗的優(yōu)點是使用的樣品量較少(標準是1.0ml，0.1～2. 0ml 均可)，動態(tài)范圍大(50～3 000 000IU/ml)，反應快(2小時可以檢測 48份標本)，特異性可以達到99. 7%(95%的可信區(qū)間是98.5%~100%)、精密性1000一3000 000IU/ml是0.1210g、≤1000IU/ml是0.2810g。

反應在一支管子內(nèi)完成，不需要溫度循環(huán)，提取的RNA相對較純，不受抑制 PCR 擴增的干擾物質(zhì)影響等。除血漿以外，這個方法還可以用來測定組織中的病毒載量。

4.hiv檢測不同方法的比較 3種測定病毒載量的方法都有各自的源于方法本身的優(yōu)勢和不足;大量配對比較實驗表明，在允許的動態(tài)范圍內(nèi)3種方法測定的結(jié)果有高度相關(guān)性，也都具有較高的敏感性和重復性，抗病毒治療以后血漿病毒載量的變化用3種方法測量的結(jié)果也是相似的。

但是3種方法測定的絕對值卻不能直接比較，不同方法間的變異可以達到 0.08一0.26log(1.2-1.9倍)。在澳大利亞進行的一項評估顯示，Amplicor HIV-1 Mo-nitor 1.0和HIV-1 Quantiplex 2.0的變異系數(shù)分別是53%-87%和22% - 31%，AmplicorHIV-1 Monitor l.5和HIV-1 Quantiplex 3.0的變異系數(shù)分別是82%-86%和16%-23%，這些結(jié)果提示即使使用最新版本的檢測試劑，不同的實驗室和不同方法之間仍然有很大的差別，因此檢測病毒載量必須始終在相同的實驗使用相同的方法。